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中壓制備色譜的多種分析方法探討

 更新時(shí)間:2022-06-20 點(diǎn)擊量:1473
  中壓制備色譜的主要部件為輸液泵、進(jìn)樣閥、檢測器、餾分收集器等,比如瑞士公司的早期的中壓液相制備色譜,其輸液泵流速可達(dá)156mL/min,并配有阻尼器,以保證液流的穩(wěn)定;進(jìn)樣器配有0.5-50mL的不同體積的定量管;檢測器有紫外和示差折光檢測器,流通池體積比較大,允許大流量流動(dòng)相通過而無需分流;餾分收集器有原盤式和排式兩種,原盤式的接收管多達(dá)80個(gè),而后者則更多;色譜柱內(nèi)徑9-105mm,長度250-1760mm不等。
 
  對于一般中壓制備色譜,當(dāng)色譜柱直徑較大時(shí),柱頭往往設(shè)計(jì)成錐形或有類似于傘狀的液流導(dǎo)向結(jié)構(gòu),使得當(dāng)大量樣品進(jìn)入到柱頭上時(shí),能迅速地分散到整個(gè)柱橫截面上,及時(shí)被流動(dòng)相沖走,避免了因樣品的局部過濃而引起柱超負(fù)荷和譜帶加寬。柱子填料則采用比較耐壓的交聯(lián)改性的多糖凝膠(如Sepharose CL,Superose等),聚合物微球,復(fù)合材料介質(zhì)或硬質(zhì)SiO2基體的化學(xué)鍵合相等,粒徑一般在25~40um(常用的填料尺寸是15-25um,25-40um或40-63um),可采用濕法或干法裝柱。
 
  中壓制備色譜根據(jù)液相方法的流速和洗脫時(shí)間計(jì)算溶劑消耗量,裝流動(dòng)相的容器應(yīng)清潔。含水流動(dòng)相建議在實(shí)驗(yàn)前配制,并注意流動(dòng)相的保質(zhì)期。色譜柱都有一定的pH使用范圍,流動(dòng)相的pH應(yīng)在色譜柱耐受的pH范圍內(nèi)。長時(shí)間停用或者更換流動(dòng)相等,可能導(dǎo)致溶劑管路或溶劑泵被引入氣泡,需要先排出氣泡再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。操作方法:打開溶劑泵的排空閥,開啟溶劑泵的流速,排出溶劑管路和泵中氣泡,直至排出的廢液連續(xù)無間斷,表明氣泡已排干凈。
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